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小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒實驗使用說明書
BS-9418小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒
一、試劑盒基本信息
小鼠抑絲蛋白2(PFN2)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心法原理設(shè)計，用于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿等樣本中的PFN2蛋白濃度。本試劑盒具有高靈敏度(通常≤0.137ng/mL)和良好的特異性，與相似物質(zhì)無明顯交叉反應(yīng)?。檢測線性范圍一般為0.312-20ng/mL，精密度批內(nèi)差CV<10%，批間差CV<12%?。
二、試劑盒組成
試劑盒主要包含以下組分(以96T規(guī)格為例)：
預包被酶標板：8×12條(包被PFN2捕獲抗體)
標準品：1支(需按說明書稀釋)
標準品/樣品稀釋液：15ml
生物素化檢測抗體(100×)：1支
生物素化檢測抗體稀釋液：12ml
SABC復合物：12ml
TMB顯色液(A/B)：各6ml
終止液：12ml
20×濃縮洗滌液：60ml
封板膠紙：4張?
三、樣本收集與處理
1. 樣本類型
適用于血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清液及其他生物體液?。
2. 樣本采集
血清?：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管收集血液，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘分離血清
血漿?：使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清
組織勻漿?：加入適量生理鹽水搗碎后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清
細胞上清液?：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物?
3. 樣本保存
短期(48小時內(nèi))可保存于2-8℃;長期保存需分裝后凍存于-20℃或-80℃，避免反復凍融?。
四、實驗操作步驟
1. 試劑準備
標準品稀釋?：按照說明書進行梯度稀釋(通常為1:2系列稀釋)
洗滌液配制?：將20×濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋?
2. 加樣
設(shè)空白孔(不加樣品及酶標試劑)、標準孔和待測樣品孔
標準孔加入50μl標準品
待測樣品孔先加40μl樣品稀釋液，再加10μl待測樣品(終稀釋度5倍)
加樣時避免觸及孔壁，輕輕混勻?
3. 孵育
封板后37℃溫育30分鐘?
溫育時建議將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，避免液體蒸發(fā)?
4. 洗滌
手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩盡，重復5次
最后一次洗滌后在吸水紙上拍干，避免殘留?
5. 加檢測抗體
每孔加入50μl生物素化檢測抗體工作液(空白孔除外)
37℃溫育30分鐘?
6. 加酶結(jié)合物
每孔加入50μl酶結(jié)合物工作液
37℃避光溫育30分鐘?
7. 顯色
每孔依次加入50μl顯色劑A和50μl顯色劑B
37℃避光顯色10分鐘(需定時觀察顏色變化)?
8. 終止反應(yīng)
每孔加入50μl終止液(顏色由藍變黃)
15分鐘內(nèi)完成OD值測定?
五、結(jié)果計算
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，繪制標準曲線
根據(jù)樣品OD值，從標準曲線計算出相應(yīng)濃度
若樣品經(jīng)過稀釋，需乘以稀釋倍數(shù)得到實際濃度?
六、注意事項
試劑保存?：未開封試劑盒2-8℃保存;使用前室溫平衡20分鐘;濃縮洗滌液結(jié)晶屬正常現(xiàn)象，水浴加熱溶解后使用?
操作規(guī)范?：
使用一次性吸頭避免交叉污染
不同批次試劑勿混用
嚴格按說明書控制溫育時間和溫度?
安全防護?：
操作時佩戴手套和口罩
避免直接接觸終止液和顯色液
勿用嘴吸取任何試劑?
質(zhì)量控制?：
每次實驗應(yīng)包含標準曲線和質(zhì)控樣本
回收率應(yīng)在80-120%之間(血清樣本回收率通常為87-94%)?
結(jié)果解釋?：
本試劑盒僅供科研使用，不用于臨床診斷
樣本值超出檢測范圍時需適當稀釋后重測
注：以上資料僅供參考，具體產(chǎn)品請咨詢技術(shù)老師或是品牌供應(yīng)商。
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